1、去百度文库,查看完整内容> 内容来自用户:shuiyinszbj 细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究,而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养,因此在样本制备,上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
2、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3、3L 70%乙醇(用无菌蒸馏水配制)5L无菌蒸馏水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
(资料图片)
4、盖紧盖子,振摇鞘液筒,确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
5、安好鞘液筒。
6、3、将过滤器短接,否则乙醇将破坏滤膜。
7、4、用70%乙醇冲洗收集管接口处,并喷洒进样口处的空气。
8、5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管(若不使用浓缩器)。
9、6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
10、7、设分选门(画一个空门使机器进行分选操作)。
11、9、从Acquire menu选择SortSetup。
12、在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
13、按液流控制键RUN。
14、10、在Setup方框中打叉,点击Acquisition Control菜单中Acquire。
15、1跑乙醇直至2支收集管注满(每管注满需要9min),点击Pause,Abort。
16、12、再重复上述步骤2次,共需要1h。
17、13、断开鞘液筒,在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水,振摇鞘液筒,倒掉液体,反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
18、14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水,盖紧盖子。
19、安好鞘液筒。
20、25、3、。
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